ГОСТ Р 55312-2012 Прополис. Метод определения флавоноидных соединений

ГОСТ Р 55312-2012

Группа С52

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОПОЛИС

Метод определения флавоноидных соединений

Propolis. Method for determination of flavonoid compositions

ОКС 65.140

Дата введения 2014-01-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением "Научно-исследовательский институт пчеловодства" Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИ пчеловодства Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 432 "Пчеловодство"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1580-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Правила применения настоящего стандарта установлены в ГОСТ Р 1.0-2012 (раздел 8). Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (gost.ru)

1 Область применения

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на прополис и устанавливает метод определения флавоноидных соединений.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ Р 52001-2002 Пчеловодство. Термины и определения

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования.

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.103-83 Система стандартов безопасности труда. Одежда специальная защитная, средства индивидуальной защиты ног и рук. Классификация

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28886-90 Прополис. Технические условия

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте приведены термины по ГОСТ Р ИСО 5725-1, ГОСТ Р 52001.

4 Отбор и подготовка пробы

4.1 Отбор проб - по ГОСТ 28886 (подраздел 3.1).

4.2 Прополис в комках, брикетах измельчают. Анализируемую пробу прополиса тщательно перемешивают не менее 3 мин.

5 Сущность метода

Метод основан на спектрофотометрическом определении оптической плотности комплексов, образующихся при взаимодействии флавоноидов, входящих в состав продуктов пчеловодства, с хлоридом алюминия. В качестве стандарта служит рутин. Определение массовой доли суммы флавоноидов в продуктах пчеловодства в пересчете на рутин следует проводить в интервале длин волн 408-420 нм.

6 Требования безопасности проведения работ

6.1 При проведении измерений необходимо соблюдать требования электробезопасности при работе с приборами по ГОСТ Р 12.1.019.

6.2 Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

6.3 При выполнении анализов необходимо выполнять требования безопасности при работе с реактивами по ГОСТ 12.4.103.

6.4 К проведению анализов допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже среднего технического образования, владеющие навыками проведения анализов и изучившие инструкции по эксплуатации используемой аппаратуры.

7 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

7.1 Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0,001 г по ГОСТ Р 53228.

7.2 Спектрофотометр, позволяющий проводить измерение оптической плотности при длине волны 390-420 нм.

7.3 Кюветы кварцевые с толщиной слоя раствора, поглощающего свет, равной 1 см.

7.4 Горелка газовая, электроплитка или колбонагреватель по ГОСТ 14919.

7.5 Колбы мерные наливные 2-25-1, 2-50-1, 2-100-1 по ГОСТ 1770.

7.6 Колбы конические Кн-1-100-14/23, Кн-1-250-14/23 по ГОСТ 25336.

7.7 Воронки В-36-60 или В-36-80 по ГОСТ 25336.

7.8 Механические дозаторы 1-канальные с варьируемыми объемами дозирования 100-1000 мкл, 1-5 см 1-го класса точности.

7.9 Пипетки 2-1-1-1, 2-2-25, 2-2-5 по ГОСТ 29227.

7.10 Баня водяная лабораторная с электрическим или огневым подогревом.

7.11 Цилиндры мерные 1-100 по ГОСТ 1770.

7.12 Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

7.13 Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652, с массовой долей 96%.

7.14 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

7.15 Алюминий хлористый 6-водный , с содержанием основного вещества не ниже 99%, Fluka, каталожный номер 7784-13-6.

7.16 Рутин, ГСО.

Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.

8 Подготовка к выполнению измерений

8.1 Приготовление 5% раствора хлористого алюминия в 60%-ном этаноле

В коническую колбу вместимостью 250 см по ГОСТ 25336 взвешивают (5,000±0,001) г хлористого алюминия, растворяют в (50,0±0,5) г 60%-ного этанола, массу раствора доводят до (100,00±0,01) г 60%-ным этанолом и тщательно перемешивают. Срок хранения раствора - не более одного года.

8.2 Приготовление раствора ГСО рутина

(0,050±0,001) г ГСО рутина взвешивают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см по ГОСТ 1770, добавляют 40 см 60%-ного этанола, нагревают до 50 °С - 60 °С и выдерживают до полного растворения рутина. Затем охлаждают до комнатной температуры, доводят до метки 60%-ным этанолом и тщательно перемешивают.

8.3 Построение калибровочного графика

В две мерные колбы вместимостью 25 см по ГОСТ 1770 дозатором вносят по 0,2 (0,4; 0,6; 0,8, 1,0 и 1,2) см раствора рутина по 6.7.2.2 концентрацией 1 мг/см; в одну колбу добавляют 4 см раствора хлористого алюминия по 6.7.2.1 (рабочий раствор), доводят до метки обе колбы 60%-ным этанолом и тщательно перемешивают. Через 30 мин измеряют оптическую плотность рабочих растворов относительно растворов сравнения (рутин без хлористого алюминия) при длине волны максимума поглощения в интервале 390-420 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 1 см.

При построении калибровочного графика на оси абсцисс откладывают количество рутина в миллиграммах, содержащегося в 25 см рабочего раствора, а по оси ординат - максимальное значение оптической плотности в указанном диапазоне.

Калибровочный график должен быть линейным и проходить через начало координат.

9 Проведение измерений

9.1 Подготовка пробы

(1,000±0,001) г прополиса взвешивают в конической колбе вместимостью 10 см по ГОСТ 25336, добавляют (30,0±0,5) см 60%-ного этанола, колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц прополиса со стенок. Надосадочную жидкость фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 см так, чтобы частицы прополиса не попали на фильтр.

Экстракцию флавоноидов повторяют еще дважды в описанных выше условиях, прибавляя к остатку по (30,0±0,1) см 60%-ного этанола. Фильтраты объединяют, охлаждают до (20±3) °С и доводят до метки (100,00±0,01) см 60%-ным этанолом.

9.2 Проведение испытания

В две мерные колбы вместимостью 25 см дозатором вносят по (5,00±0,01) см экстракта по 6.7.2.4. В одну колбу (анализируемый раствор) добавляют (4,0±0,1) см раствора хлористого алюминия по 6.7.2.1, обе колбы доводят до метки 60%-ным этанолом и тщательно перемешивают. Через 30 мин измеряют оптическую плотность анализируемого раствора относительно раствора сравнения (экстракт без хлористого алюминия) при длине волны максимума поглощения в интервале 390-420 нм в кюветах с толщиной оптического слоя 1 см.

По калибровочному графику, зная оптическую плотность анализируемого раствора, находят количество рутина в мг в 25 см раствора.

10 Обработка и представление результатов испытаний

10.1 Массовую долю флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) , %, вычисляют по формуле

, (1)

где - количество рутина в 25 см, найденное по калибровочному графику, мг;

- объем экстракта, см;

- пересчет в проценты, %;

- масса прополиса, взятого для анализа, г;

- объем экстракта, взятого для анализа, см.

10.2 За окончательный результат определения флавоноидных соединений принимают среднеарифметическое значение двух параллельных измерений, полученных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости, рассчитанное по формуле

, (2)*

где и - результаты двух параллельных определений флавоноидных соединений кислот, полученных в условиях повторяемости, %;

* - значение предела повторяемости, приведенное в таблице 1, %.
_______________
* Формула и экспликация соответствуют оригиналу. - .

10.3 Расхождение между результатами определения флавоноидных соединений, полученными в двух лабораториях в условиях воспроизводимости, должно соответствовать условию приемлемости по формуле

, (3)*

где и - результаты двух определений флавоноидных соединений, полученных в условиях воспроизводимости, %;

* - значение предела воспроизводимости, приведенное в таблице 1, %.
_______________
* Формула и экспликация соответствуют оригиналу. - .


Таблица 1 - Диапазоны измерений, показатели точности и прецизионности метода определения флавоноидных соединений при доверительной вероятности 0,95

10.4 Форма представления результатов

Результат содержания флавоноидных соединений (в пересчете на рутин) в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде

%, при 0,95,

где - абсолютная погрешность результатов измерений, %, вычисляемая по формуле

или , (4)

где - относительная погрешность измерений флавоноидных соединений по таблице 1, %.

10.5 Результаты испытаний оформляют протоколом.


__________________________________________________________________________
УДК 638.178:006.354 ОКС 65.140 С52

Ключевые слова: прополис, флавоноидные соединения, в пересчете на рутин, метрологические характеристики
__________________________________________________________________________



Электронный текст документа
и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2014