ГОСТ 16445-2012 Сыворотка гемолитическая для реакции связывания комплемента. Технические условия

ГОСТ 16445-2012

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СЫВОРОТКА ГЕМОЛИТИЧЕСКАЯ ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА

Технические условия

Serum haemolitic for the complement fixation test. Specification

МКС 11.220

Дата введения 2014-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Порядок разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 54-П от 3 декабря 2012 г. N 54-П*)

________________

* Текст документа соответствует оригиналу. - .

За принятие проголосовали:

4 ВЗАМЕН ГОСТ 16445-78

5 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. N 316-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 года

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на гемолитическую сыворотку для реакции связывания комплемента (далее - сыворотка), представляющую собой консервированную глицерином сыворотку крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана.

Сыворотка предназначена для применения в качестве компонента реакции связывания комплемента (далее - РСК) в ветеринарии.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9142-90 Ящики из гофрированного картона. Общие технические условия

ГОСТ 12301-2006 Коробки из картона, бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия

ГОСТ 12303-80 Пачки из картона, бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия

ГОСТ 14192-90* Маркировка грузов

________________

* Действует ГОСТ 14192-96, здесь и далее по тексту. - .

ГОСТ 16446-2012 Комплемент сухой для реакции связывания комплемента. Технические условия

ГОСТ 22524-77 Пикнометры стеклянные. Технические условия.

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28085-89 Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования и методы испытаний.

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части не затрагивающей эту ссылку.

3 Технические требования

3.1 Сыворотка должна соответствовать требованиям настоящего стандарта и производиться по технологическому регламенту.

3.2 По физико-химическим и биологическим свойствам сыворотка должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в таблице 1.

Таблица 1

3.3 Упаковывание, маркирование

3.3.1 Сыворотку расфасовывают по 1 см в стерильные ампулы из нейтрального стекла и запаивают.

На ампулы наносят маркировку с указанием:

- наименования организации-производителя;

- наименования сыворотки;

- номера серии;

- даты выпуска;

- количества сыворотки в ампуле, см;

- срока годности;

- надписи: "Для ветеринарного применения".

3.3.2 Ампулы с сывороткой упаковывают в картонные коробки по ГОСТ 12301 или пачки по ГОСТ 12303 с разделительными перегородками (прокладками), обеспечивающими их сохранность при транспортировании и хранении.

3.3.3 На каждую коробку наклеивают этикетку, на которой указывают:

- наименование организации-производителя и ее товарный знак;

- наименование сыворотки;

- количество ампул в коробке;

- количество сыворотки в ампуле, см;

- количество доз в ампуле;

- номер серии;

- дату выпуска;

- срок годности;

- титр;

- условия хранения;

- надпись: "Для ветеринарного применения";

- обозначение настоящего стандарта;

- штриховой код;

- информацию о подтверждении соответствия;

- предупредительную надпись: "Разводить без учета содержания глицерина!".

3.3.4 Коробки с сывороткой упаковывают в картонные ящики по ГОСТ 9142 или аналогичные массой брутто не более 15 кг. Внутрь каждого ящика вкладывают контрольный лист с указанием:

- наименования сыворотки,

- номера серии,

- даты упаковки,

- фамилии или номера упаковщика.

3.3.5 Каждый ящик (транспортная тара) маркируют по ГОСТ 14192 с указанием манипуляционных знаков: "Хрупкое. Осторожно", "Ограничение температуры".

3.3.6 Маркировка, характеризующая упакованную продукцию, должна содержать следующую информацию:

- наименование организации-производителя и ее адрес (в том числе страну);

- наименование сыворотки;

- число коробок в ящике;

- номер серии;

- дату выпуска;

- условия хранения и перевозки;

- массу брутто;

- надпись: "Для ветеринарного применения".

4 Правила приемки

4.1 Каждая серия сыворотки должна быть принята (проверена) отделом, отвечающим за контроль качества готовой продукции организации-производителя в соответствии с нормативными документами государства, принявшего стандарт.

4.2 Серией сыворотки считают определенное количество сыворотки, полученное за один технологический цикл, одновременно представленное на контроль и оформленное одним документом о качестве.

4.3 В документе о качестве указывают:

- наименование организации-производителя;

- наименование сыворотки;

- номер серии;

- дату изготовления (месяц и год);

- объем серии;

- результаты испытания по показателям качества;

- срок годности (месяц и год);

- условия хранения;

- обозначение стандарта;

- номер и дату выдачи документа о качестве;

- заключение и подпись лица, выдавшего документ о качестве.

4.4 Для контроля качества сыворотки от каждой серии отбирают выборку. Из выборки выделяют среднюю пробу в количестве 40 ампул. 20 ампул с сывороткой используют для проведения испытания по показателям качества, указанным в таблице 1, а 20 ампул направляют в архив организации-производителя. Пробы в архиве хранят в течение срока годности.

4.5 Архивные образцы маркируют надписью "Архив", опечатывают и снабжают документом установленной формы с указанием:

- наименования сыворотки;

- номера серии;

- даты выпуска (месяц и год);

- даты отбора проб;

- объема серии;

- числа отобранных образцов;

- должности и подписи лица отобравшего пробы;

- срока годности (месяц и год);

- обозначения настоящего стандарта;

- срока хранения проб в архиве.

4.6 При неудовлетворительных результатах испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве проб сыворотки, взятой от той же серии и на удвоенном количестве материалов. Результаты повторных испытаний считают окончательными и распространяют на всю серию.

В случае неудовлетворительных результатов повторной проверки серию сыворотки считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта, ее бракуют и уничтожают путем раздавливания ампул с последующим разведением содержимого ампул водой в соотношении 1:100 и сливом образующегося раствора в промышленную канализацию, о чем составляют соответствующий акт.

4.7 Контроль качества сыворотки, поступающей по рекламации, проводит организация-производитель, а при разногласиях в оценке качества между производителем и потребителем контроль проводит организация, уполномоченная в порядке, действующем на территории государства, принявшего стандарт.

5 Методы испытаний

5.1 Для определения внешнего вида, наличия посторонней примеси, хлопьев и осадка ампулы с сывороткой встряхивают и просматривают в проходящем свете.

Содержимое ампул должно представлять собой прозрачную, слегка опалесцирующую жидкость желтого цвета с розовым оттенком без хлопьев, осадка и посторонней примеси.

5.2 Определение массовой доли глицерина

5.2.1 Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения испытания применяют:

- пикнометр вместимостью 1-2 см по ГОСТ 22524;

- баню водяную или термостат;

- термометр технический стеклянный ртутный со шкалой от 0°С до 100°С и ценой деления 1°С по ГОСТ 28498;

- весы лабораторные аналитические;

- эксикатор по ГОСТ 25336;

- пипетки градуированные для отбора жидкости по ГОСТ 29227;

- воду дистиллированную по ГОСТ 6709, кипяченую или бидистиллированную.

5.2.2 Подготовка к испытанию

Пикнометр тщательно очищают хромовой смесью, промывают водой, ополаскивают спиртом, затем эфиром, высушивают продуванием воздуха или в сушильном шкафу и охлаждают в эксикаторе.

5.2.3 Проведение испытания

Пикнометр взвешивают на аналитических весах с погрешностью не более 0,0002 г. Наполняют его дистиллированной водой до метки, выдерживают на водяной бане или в термостате при температуре 20 °С в течение 20-30 мин и вновь корректируют заполнение водой до метки. Затем пикнометр обтирают и взвешивают на аналитических весах. Освобождают пикнометр от воды, сушат, как указано выше, и заполняют испытуемой гемолитической сывороткой. Дальнейшие процедуры проводят так же, как при определении массы воды.

5.2.4 Обработка результатов

Плотность гемолитической сыворотки , содержащей глицерин, г/см, вычисляют по формуле

, (1)

где - масса пробы сыворотки в объеме пикнометра, г;

- масса пробы воды в объеме пикнометра, г.

За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое результатов трех параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,0008 г/см.

Плотность гемолитической сыворотки должна составлять 1,115-1,145 г/см, что соответствует 45%-55% массовой доли глицерина в сыворотке.

5.3 Определение стерильности

Стерильность сыворотки определяют по ГОСТ 28085.

Сыворотка должна быть стерильной.

5.4 Определение активности (титра) и гемолитических свойств

Активность гемолитической сыворотки определяют по показателю 100%-ного гемолиза эритроцитов барана в гемолитической системе. Титрование гемолитической сыворотки производится комплементом для реакции связывания комплемента ГОСТ 16446 с титром 0,08-0,14 в гемолитической системе.

Титром гемолитической сыворотки следует считать наибольшее ее разведение (наименьшее количество), при котором в течение 10 мин при температуре 37°С-38°С наступает полный (100%-ный) гемолиз 0,2 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии 0,2 см комплемента в разведении 1:20 в общем объеме жидкости 1,0 см.

Сыворотка должна характеризоваться полным отсутствием гемолиза эритроцитов барана в пробирке без комплемента.

5.4.1 Оборудование и реактивы

Для проведения испытания применяют:

- штативы;

- пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;

- стаканы лабораторные, колбы по ГОСТ 25336;

- колбы мерные вместимостью 100, 500 и 1000 см по ГОСТ 1770;

- пипетки вместимостью до 10 см с ценой деления 0,1 см по ГОСТ 29227;

- пипетки вместимостью 1 см с ценой деления 0,01 см по ГОСТ 29227 или дозаторы пипеточные;

- баню водяную;

- маркеры по стеклу;

- физиологический раствор рН 6,8-7,2.

5.4.2 Подготовка к испытанию

5.4.2.1 Подготовка разведений гемолитической сыворотки

Готовят исходное разведение гемолитической сыворотки 1:100 (0,1 см гемолитической сыворотки и 9,9 см физиологического раствора), из которого готовят разведения от 1:500 до 1:2000 (см. таблицу 2).

Таблица 2

Разведения сыворотки приготовлены с учетом массовой доли в ней глицерина (50%), поэтому при расчете количества сыворотки для постановки РСК следует исходить из ее титра, не учитывая содержание глицерина, то есть при титре сыворотки 1:1000 ее удвоенный титр будет 1:500, для приготовления которого следует взять 0,1 см сыворотки и 49,9 см физиологического раствора; при титре 1:1500 удвоенный титр 1:750 (0,1 см сыворотки и 74,9 см физиологического раствора) и т.д.

5.4.2.2 Подготовка 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана

Кровь у барана берут с утра до кормления из яремной вены во флакон со стеклянными (керамическими) бусами и интенсивно перемешивают круговыми движениями флакона в процессе взятия и в течение 7 мин после. Затем фильтруют через марлю и отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500-3000 об/мин по 15-10 мин до полного обесцвечивания промывной жидкости, но не более четырех раз. Из осадка эритроцитов готовят 2,5%-ную взвесь на физиологическом растворе.

5.5 Проведение испытания

5.5.1 По 0,2 см каждого разведения сыворотки переносят в серологические пробирки с указанием разведений, начиная с наибольшего разведения (1:2000). Во все пробирки вносят по 0,2 см комплемента в разведении 1:20, по 0,4 см физиологического раствора и по 0,2 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана.

Одновременно в этот же штатив ставят три пробирки для контроля.

В пробирки вносят:

в первую:

- 0,2 см гемолитической сыворотки в разведении 1:100;

- 0,6 см физиологического раствора;

- 0,2 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана;

во вторую:

- 0,2 см комплемента в разведении 1:20;

- 0,6 см физиологического раствора;

- 0,2 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана;

в третью:

- 0,2 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана;

- 0,8 см физиологического раствора.

В первой контрольной пробирке определяют гемолитические свойства сыворотки, во второй - гемолитические свойства комплемента, в третьей - резистентность эритроцитов барана (таблица 3).

Таблица 3

Штатив встряхивают и переносят в водяную баню на 10 мин при температуре 37°С-38°С. Штатив с пробирками извлекают из бани и немедленно проводят учет результатов реакций в проходящем свете.

5.5.2 Учет результатов

Сыворотку считают активной при титре не менее 1:1000 и при отсутствии гемолиза эритроцитов в контрольных пробирках.

6 Транспортирование и хранение

6.1 Гемолитическую сыворотку транспортируют всеми видами крытого транспорта.

Допускается транспортирование гемолитической сыворотки при температуре не выше 20°С, при этом срок транспортирования не должен превышать более 5 сут.

6.2 Гемолитическую сыворотку хранят в чистом, сухом, темном помещении при температуре от 2°С до 8°С.

6.3 Срок годности гемолитической сыворотки - три года с даты изготовления. Датой изготовления считают дату расфасовки. Датой выпуска гемолитической сыворотки считают дату подписания документа о качестве.

Электронный текст документа

и сверен по:

, 2014