ГОСТ 28424-90 Эмбрионы крупного рогатого скота. Технические условия

ГОСТ 28424-90

Группа Р38

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ЭМБРИОНЫ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Технические условия

Cattle embryos. Specifications

ОКП 98 8500

Срок действия с 1991-01-01
до 1996-01-01*
_______________________
* См. ярлык "Примечания".

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР

РАЗРАБОТЧИКИ

Н.И.Сергеев, д-р биол. наук (руководитель темы); С.В.Советкин, канд. биол. наук; Ю.В.Фомин, д-р вет. наук; М.Н.Ефремова; Е.В.Пронина, канд. хим. наук; Е.А.Назаров, вет. врач; А.Н.Мелентьев, канд. с.-х. наук

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 05.01.90 N 10

3. Срок первой проверки - III кв. 1994 г., периодичность проверки - 5 лет

4. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

___________________

* В бумажном оригинале п.1.4.4 не приводится. ГОСТ 9293-74 упоминается в п.1.5.2. - .

Настоящий стандарт распространяется на эмбрионы крупного рогатого скота и устанавливает требования к свежеполученным и замороженным эмбрионам, предназначенным для пересадки животным-реципиентам.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Эмбрионы крупного рогатого скота должны соответствовать требованиям настоящего стандарта и быть получены в соответствии с правилами по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота и ветеринарно-санитарными требованиями к центрам и пунктам по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота, утвержденным в установленном порядке.

1.2. Эмбрионы для пересадки должны быть получены от клинически здоровых коров-доноров в возрасте от 3 лет и старше, осемененных спермой быков-улучшателей.

1.3. Характеристики

1.3.1. Эмбрионы, пригодные для пересадки, должны быть в возрасте 7-9 сут и находиться в стадии развития ранней морулы (Мо1, черт.1-4), поздней морулы (Мо2, черт.5-8), ранней бластоцисты (Бл1, черт.9-12) и поздней бластоцисты (Бл2, черт.13-16).

Черт.1 - Морула ранняя, отличная

Черт.2 - Морула ранняя, хорошая

Черт.3 - Морула ранняя, удовлетворительная. Неравномерные шары дробления. Грануляция в бластомерах

Черт.4 - Морула ранняя, условно пригодная. Рыхлые бластомеры

Черт.5 - Морула поздняя, отличная

Черт.6 - Морула поздняя, хорошая. Выступающие светлые бластомеры

Черт.7 - Морула поздняя, удовлетворительная. Частичный зародыш. Часть бластомеров выступает и разрушена

Черт.8 - Морула поздняя, условно пригодная. Грануляция значительной части комплекса

Черт.9 - Бластоциста ранняя, отличная

Черт.10 - Бласточиста ранняя, хорошая

Черт.11 - Бластоциста ранняя, удовлетворительная. Сжатие комплекса, трещина зоны пеллюцида

Черт.12 - Бластоциста ранняя, условно пригодная, деформация, сжатие клеток

Черт.13 - Бластоциста поздняя, отличная

Черт.14 - Бластоциста поздняя, хорошая

Черт.15 - Бластоциста поздняя, удовлетворительная. Сжатие клеточного комплекса, незначительный скол зоны

Черт.16 - Бластоциста поздняя, условно пригодная. Сжатие клеточного комплекса. Скол зоны пеллюцида

1.3.2. Эмбрионы в зависимости от морфологических показателей подразделяют на "отличные", "хорошие", "удовлетворительные", "условно пригодные" и "плохие" в соответствии с требованиями, указанными в таблице.

1.3.3. Свежеполученные и подлежащие замораживанию эмбрионы не должны быть контаминированы патогенными и условно-патогенными микроорганизмами, грибами, вирусами и другими микроорганизмами.

1.4. Упаковка

1.4.1. Каждую серию свежеполученных эмбрионов после морфологической оценки помещают в соломинки (пайеты) или полиэтиленовые пробирки, содержащие питательную среду, состоящую из фосфатно-буферной среды с 20%-ной фетальной сывороткой крови крупного рогатого скота или сыворотки крови для биотехнологических работ, или 0,4%-ного альбумина бычьей сыворотки крови и санирующего препарата ГАМП в дозе 100 мкг/см, или спермосан-ППК в дозе 200 ЕД/см среды. Укупорку соломинок (пайет), пробирок проводят в соответствии с правилами, утвержденными в установленном порядке.

1.4.2. Эмбрионы, предназначенные для замораживания, после четырехкратной проводки через фосфатно-буферную среду, содержащую наиболее высокую концентрацию криопротектора 1,5 г/моль диметилсульфоксида (ДМСО) или 1,4 г/моль глицерина, 20%-ную фетальную сыворотку крупного рогатого скота или 20%-ную сыворотку крови для биотехнологических работ и санирующий препарат, помещают в пробирки или соломинки с указанной средой, закрывают пластиковыми пробками и замораживают в жидком азоте в соответствии с правилами, утвержденными в установленном порядке.

1.5. Маркировка

1.5.1. Каждую пробирку или соломинку (пайету) маркируют, нанося несмывающейся краской номер серии и дату получения эмбрионов.

1.5.2. Пробирки, соломинки (пайеты) с замороженными эмбрионами помещают в специальные канистры, которые переносят в сосуд Дьюара по ГОСТ 9293, содержащий не менее одной трети объема азота.

2. ПРИЕМКА

2.1. Свежеполученные и замороженные эмбрионы принимают сериями.

Под серией понимают любое количество эмбрионов, полученное от одной коровы-донора за один технологический цикл и оформленное одним документом о качестве (сертификат, см. приложение).

2.2. Каждая серия свежеполученных и замороженных эмбрионов должна быть принята (проверена) на предприятии-изготовителе специалистом этого предприятия.

2.3. Каждая серия замороженных эмбрионов после оттаивания при подготовке к пересадке их реципиентам должна быть принята (проверена) специалистом по пересадке эмбрионов предприятия-потребителя или изготовителя.

2.4. По требованию потребителя проверку санитарного состояния эмбрионов проводит отдел биологического контроля предприятия-изготовителя или ветлаборатория (районная, областная, краевая или республиканская).

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1. Определение качества эмбрионов по морфологическим показателям.

3.1.1. Аппаратура, материалы и среды

Лупа бинокулярная марок МБС-9, МБС-10 или аналогичных марок.

Микроскоп марок МБИ-10, МБИ-13 или аналогичных марок.

Термостат с температурой нагрева 37-38°С.

Сифон или шприц марки "Рекорд" с удлиненной иглой.

Чашки Петри или часовые стекла.

Цилиндры мерные вместимостью 500 см по ГОСТ 1770 или флаконы вместимостью 450-500 см.

Пипетка Пастера.

Среда фосфатно-буферная с 20%-ной фетальной сывороткой крови крупного рогатого скота или 20%-ной сывороткой крови для биотехнологических работ.

Трипсин, раствор с массовой долей 0,25%.

Санирующие препараты.

3.1.2. Подготовка к испытанию

Растворы, полученные после вымывания эмбрионов из каждого рога матки коров-доноров, помещают с соблюдением правил асептики в отдельные стерильные эмбриоприемники вместимостью 450-500 см (цилиндры или флаконы), которые выдерживают в термостате при 37-38°С или при комнатной температуре не ниже 18°С в течение 20 мин для осаждения эмбрионов. Верхнюю часть раствора удаляют с помощью стерильного сифона или шприца с удлиненной иглой, оставляя 60-100 см раствора. Отстой переносят в 2-3 стерильные чашки Петри диаметром 90 мм, дно которых с внешней стороны расчерчено на квадраты со стороной 1 см.

3.1.3. Проведение испытания

Качество эмбрионов по морфологическим показателям определяют у всех свежеполученных эмбрионов и замороженных эмбрионов после их оттаивания.

Эмбрионы просматривают под бинокулярной лупой при увеличении 20-28. Определяют по морфологическим показателям эмбрионы с оценкой "плохие" и их удаляют. Оставшиеся эмбрионы обрабатывают раствором трипсина с массовой долей 25% при 37-38°С в течение 3-5 мин, а затем промывают 2 см стерильной фосфатно-буферной средой, содержащей 20% фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота или 20% сыворотки крови для биотехнологических работ и санирующий препарат. Промывку эмбрионов в стерильных средах проводят четыре раза. Для проводки эмбрионов через стерильные среды каждый раз используют новую чашку Петри и пипетку Пастера. После четвертой промывки эмбрионы просматривают под микроскопом марки МБИ-10 или МБИ-13 при увеличении 1x100 в том же составе среды.

3.1.4. Обработка результатов

Оценку качества эмбрионов по морфологическим показателям проводят в соответствии с требованиями, указанными в п.1.3.2.

Свежеполученные эмбрионы с оценкой "отличные" и "хорошие" подлежат замораживанию.

Свежеполученные эмбрионы с оценкой "отличные", "хорошие" и "удовлетворительные" используют для пересадки животным-реципиентам.

Свежеполученные эмбрионы с оценкой "условно пригодные" и "плохие" выбраковывают.

Эмбрионы, замороженные с оценкой "отличные", "хорошие", "удовлетворительные" и "условно пригодные", пересаживают животным-реципиентам.

Замороженные эмбрионы с оценкой "плохие" выбраковывают.

3.2. Определение санитарного состояния эмбрионов

3.2.1. Санитарное состояние определяют у свежеполученных эмбрионов и у эмбрионов, подлежащих замораживанию.

3.2.2. Санитарное состояние свежеполученных эмбрионов устанавливают на основании выборочного микробиологического исследования третьего промывного раствора среды по п.3.1.3 не менее чем от 6 серий эмбрионов в квартал.

3.2.3. Санитарное состояние свежеполученных эмбрионов, подлежащих замораживанию, устанавливают на основании микробиологических исследований среды, использованной для подготовки эмбрионов к замораживанию после предпоследней промывки по п.1.4.2.

3.2.4. Отбор проб

Отбирают по 2 см соответствующей среды. 1 см среды используют для микробиологических исследований, а 1 см среды помещают в стеклянную ампулу или полиэтиленовую пробирку, которые запаивают или закрывают полиэтиленовыми крышками и хранят в замороженном виде в сосуде Дьюара в архиве центра или пункта по трансплантации эмбрионов до использования всех эмбрионов данной серии. На пробирке наносят несмываемой краской номер серии.

3.2.5. Аппаратура, среда

Термостат с температурой нагрева 37-38°С.

Термостат с температурой нагрева 20-22°С.

Пипетки стеклянные градуированные вместимостью 1, 2 и 10 см по ГОСТ 20292.

Пробирки стеклянные вместимостью 20 см по ГОСТ 25336.

Среда тиогликолевая или МПБ, среда Тароцци и Сабуро.

3.2.6. Проведение испытания

В две пробирки с тиогликолевой средой вносят по 0,5 см исследуемой среды и выдерживают 10-14 сут - одну пробирку в термостате при температуре 37-38°С, а другую в термостате при температуре 20-22°С. При отсутствии тиогликолевой среды проводят высевы - 0,5 см исследуемого материала на среду с МПБ и по 2-3 капли на среду Тароцци и Сабуро (по одной пробирке). Посевной материал со средой МПБ и Тароцци инкубируют при температуре 37-38°С, а со средой Сабуро при температуре 20-22°С. В качестве контроля при тех же условиях выдерживают по одной пробирке использованной среды без посевного материала.

3.2.7. Обработка результатов

Через 10-14 сут ни в одной из пробирок с посевным материалом не должно быть роста микроорганизмов.

При выделении из посевного материала условно патогенной микрофлоры проводят тщательный контроль стерильности инструментов и сред, применяемых для вымывания, кратковременного хранения и замораживания эмбрионов, а также подготовки коров-доноров к извлечению эмбрионов.

4. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1. Свежеполученные эмбрионы транспортируют в эмбриомобилях при температуре 22-25°С в сопровождении специалиста по трансплантации эмбрионов.

Замороженные эмбрионы транспортируют в сосудах Дьюара с жидким азотом, с сопровождающим, всеми видами транспорта в соответствии с правилами перевозки багажа, действующими на данном виде транспорта.

К транспортируемым эмбрионам прилагается подлинник сертификата.

4.2. Свежеполученные эмбрионы сохраняют в фосфатно-буферной среде, содержащей 20% фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота или 20% сыворотки крови для биотехнологических работ, 0,4% альбумина бычьей сыворотки крови и санирующий препарат, при температуре 22-25°С в течение 5 ч.

4.3. Замороженные эмбрионы сохраняют в фосфатно-буферной среде, содержащей 20% фетальной сыворотки крупного рогатого скота или 20% сыворотки крови для биотехнологических работ, криопротектор (ДМСО или глицерин) и санирующий препарат, в жидком азоте при минус 196°С.

4.4. Эмбрионы, оттаянные после замораживания, сохраняют в фосфатно-буферной среде, содержащей 20% фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота или 20% сыворотки крови для биотехнологических работ и санирующий препарат, при температуре 22-25°С не более 30 мин.

5. ГАРАНТИИ ПОСТАВЩИКА

5.1. Предприятие-изготовитель гарантирует соответствие качества эмбрионов требованиям настоящего стандарта при соблюдении условий транспортирования, хранения и применения, установленных стандартом, в пределах срока годности.

ПРИЛОЖЕНИЕ
Обязательное

Электронный текст документа
и сверен по:

М.: Издательство стандартов, 1990